羟自由基清除能力测定试剂盒 微量法

恒远生物生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计和荧光酶标仪。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高效专业的生化代测服务和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间，所有这些保证了我们向您提供的专业优质的服务。

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化为Fe³⁺ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备用品：

恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体12mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体12 mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。

样品的制备：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。

3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5 mg/mL。

操作步骤：

1、 酶标仪预热30min，调节波长至536nm。

2、 工作液配制：使用之前按照每管试剂一：试剂二：试剂三=100:50:100（µL）的比例配制，用多少配多少，混匀。

3、 在EP管中加入如下试剂

注意：空白管和对照管只需测定一次。

计算公式:

羟自由基清除率 D% =（A测-A对）÷（A空-A对）×100%

A空、A对、A测：空白管、对照管和测定管的吸光值。

注意事项:

为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。