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一起了解:酶联免疫DIY夹心法实验技术指南

阅读:112          发布时间:2018/12/26

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    酶联免疫吸附剂测定实验基本原理:
    1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原 或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。
    3.在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或 抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方 法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在 固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
    4.加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量 与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性 或定量分析。
    由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测 定方法达到很高的敏感度。 
        
酶联免疫DIY夹心法实验技术指南:
1.选择抗体时zui好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单 抗,必须识别不同表位的抗体;zui好从同一家公司选择抗体对。
2.为了确定zui佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗 体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在 适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行 操作。
3.标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的 细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的 细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
4.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列 稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试 剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
5.为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。
6.若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮 钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
7.当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相 干的Ig.


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