人外周血造血干细胞分离液

1. 适用于各种动物血液及骨髓本系列产品检索

2. 相关试剂及耗材

3. 注意事项

4. 应用

5. 产品性能指标

6. 贮藏及保存期限

7. 实验前准备

8. 各种动物血液及骨髓干细胞分离液使用方法说明及图例

9. HES-TBD550 使用说明

货号                     品牌              产品名称          规格         报价

1. 适用于各种动物血液 适用于各种动物血液 于各种动物血液及骨髓本系列产品检索：：：：

A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在 18℃-25℃避光保存，启封后置 4

℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于 10℃ 以下易出现白色结晶，

影响分离效果。

B． 待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在 20℃水浴

箱中复温 20 分钟保证分离液和所分离样本温度在 20℃±2℃时分离效果，且所有操作

过程一定要在无菌条件下进行。

C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响

分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索*的分离条件（具体分离条件

各实验室自定）。

D． 使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

E． *抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂

体积。

 F． 分离过程中所用其他试剂如：羟乙已基淀粉 550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及

红细胞裂解液等以我公司产品为*选择，本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、

低内毒素水平且无细胞毒性，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。

4. .. 应 4. 用

适用于从动物血液或骨髓中分离干细胞。

5.. . . 产品性能指标

pH 7.0-7.5

渗透压 280-340mOsmol/kg

内毒素 ≤0.5...EU/ml

无菌 直接接种培养 14 天后培养基澄清

澄明度及不溶性颗粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

6.. . . 贮藏及保存期限 贮藏及保存期限

18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置 4℃保存，有效期一周。

注：：：：若保证无微生物污染，启封后可置 4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

7. .. 实验前准备 7. 实验前准备

A． 试剂

干细胞分离液、全血及组织稀释液、细胞洗涤液、羟乙已基淀粉 550、胎牛血清

B． 器材

玻璃离心管、玻璃滴管

水平转子离心机、无菌工作台

8.. . . 使用方法说明及图例 使用方法说明

A.

Ⅰ. 取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混合，

37℃反应 5-10 分钟（5ml 以下样本反应 5 分钟，5ml 以上样本反应 10 分钟）；

Ⅱ. 取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液（Cat#：2010X1118），混匀后以 400g（约

1500 转/分）离心 5 分钟，弃去上清。沉淀与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）

按 1:1 比例混合，37℃反应 5-10 分钟（5ml 以下样本反应 5 分钟，5ml 以上样本反

应 10 分钟）；

B. 加入为步骤 A 中所得混合液 1/2 体积的全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）混匀 20

℃-30℃自然沉降 20-30 分钟，吸取上清备用；

C. 向步骤 B 中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）混

匀，以 500g（约 1800 转/分）离心 15 分钟（半径 15cm 水平转子），弃去上清保留沉淀

细胞；

D. 向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）调整细胞浓度为 2×108—1×

109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）；

E. 以 400g（约 1500 转/分）离心 20 分钟（半径 15cm 水平转子）；

此时，离心管中由上至下分为四层：*层；为稀释液层。第二层；为环状乳白色含所

需干细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为极少数红细胞层。收集第二层细胞放入

约为其 5-10 倍体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）中，充分混匀后以 500g（约 1800 转

/分）离心 15 分钟。沉淀经反复洗涤 2 次既得所需干细胞。

F. 为获得纯度更高的干细胞，在步骤 E 中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混匀，20℃-30℃自然沉降 20-30 分钟，收集上清。只能用于科学研究，不能用于临床检测

血小板 100-300×109/L（10 万-30 万个/mm3)

名称                                                         占白细胞总数百分比

嗜中性粒细胞                                                 30%-70%

嗜酸性粒细胞                                                 0.5%-5%

嗜碱性粒细胞                                                0%-1%

淋巴细胞                                                    20%-40%

白细胞分类计数

单核细胞                                                    3%-8%

干细胞                                                    约占外周血细胞数量3%