土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0860
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入10 mL试剂六，沸水浴搅拌溶解后待用，用不完的试剂2-8℃保存1个月。

2. 标准品：20μmol/mL 酪*酸溶液。

产品说明：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。酸性条件下，土壤酸性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪*酸；在碱性条件下，酪*酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、台式离心机、研钵、蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）  
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2. 标准溶液的稀释：取10μL 20μmol/mL酪*酸标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.2μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要220μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3. 样本测定

三、土壤酸性蛋白酶活性计算
单位定义：每天每g土样中产生1μmol的酪*酸为一个土壤酸性蛋白酶活力单位。
土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W
C标准：标准管浓度，0.2μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；T：反应时间，1d；W：样本质量，g。
注意事项：
当吸光值大于1时，建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。
实验实例：

1. 分别称取2份0.1g土样于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测定吸光度，计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.206-0.178=0.028，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g土样。

1. 分别称取2份0.1g三叶草土样于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测定吸光度，计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.831-0.612=0.219，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g土样。
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