登革热试剂操作说明书
 

目前市场上同一产品不同品牌的数量众多，怎么识别好的产品和不好的产品呢？以及操作步骤的重要性，即使是一个好的产品，样本处理不好也可能导致不好的结果，所以产品质量、操作细节和样本处理也决定了实验的成果。

科润达生物提供的是进口的登革热试剂，以及包装配送了完整的登革热试剂操作说明书，有ELISA方法检测的登革热试剂操作说明书和胶体金方法检测的登革热试剂操作说明书。并且提供体贴的售后服务，上班期间有专业的指导技术人员解答问题，产品质量优质保障，欢迎咨询订购。

下面介绍的是有关于德国IBL品牌采用ELISA方法检测人血清和血浆中IgG抗体的登革热试剂操作说明书，如有需要了解其他方法或者类型的登革热试剂操作说明书的，可以搜索科润达生物网站或者直接联系我们获取资料。

登革热IgG检测试剂操作说明书

登革热IgG检测试剂盒预期用途
登革热IgG检测试剂盒可用于人血清、血浆中抗登革热病毒IgG抗体的定性检测。

登革热IgG检测试剂盒检测原理

抗登革热病毒IgG抗体的定性酶免检测利用的ELISA技术。微孔板上预先包被了结合样品相关抗体的登革热病毒2型抗原。洗板除去未结合的样品物质后，加入辣根过氧酶标记的抗人IgG酶联物。这一酶联物可与捕获到的登革热病毒特异性抗体结合。

加入能产生蓝色反应产物的TMB底物液后，如果显示蓝色则可知已形成免疫复合物。所显示颜色的强度与样品中登革热病毒特异性IgG抗体的量成正比。加入硫酸以终止反应,以便产生黄色的终点颜色。用一酶标仪在450m处读取OD值。

登革热IgG检测试剂盒组成成分
1、微孔板：12×8可拆板条，包被有登革热2型抗原，真空密封于铝铂金属袋中。
2、样品稀释液：1瓶，内含100ml样品稀释用缓冲液，pH2±0.2，液体为黄色，待用，白盖。
3、终止液：1瓶，内含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，红盖
4、洗涤液（20×浓缩）：1瓶，50ml，含20倍浓缩的样品洗涤液，pH7.2±0.2，白盖
5、酶联物：1瓶，含20ml HRP标记的兔抗人IgG，蓝色，待用，黑盖。
6、底物液：1瓶，含15ml TMB，待用，黄盖。
7、登革热 IgG阳性质控：1瓶，2ml；黄色，待用，红盖
8、登革热 IgG临界质控：1瓶，3ml；黄色，待用，绿盖
9、登革热 IgG阴性质控：1瓶，2ml；黄色，待用，蓝盖

实验所需材料（未提供）
1）可在450/620nm处读数的酶标仪
2）37℃恒温箱
3）自动或半自动洗板机
4）取样吸头（10µl和100µl）
5）旋涡混合器
6）去离子水或双蒸水
7）试管
8）计时器

登革热IgG检测样本要求
■样本采集后（保存在2-8℃）应该在5小时内用于检测，否则应该保存在-20~-70℃。避免反复冻融，不推荐使用灭活的样本。
■样品稀释：样品使用样品稀释液以1:101的比例进行稀释。

登革热IgG检测方法
实验开始之前仔细阅读操作步骤，严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行，为了避免洗板的影响，我建议在洗板步骤时，洗板3次改成洗板5次，洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前，应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。

请至少做以下几个孔：
1孔（例A1）做空白对照孔
1孔（例B1）做阴性质控
2孔（例C1+ D1）做临界质控
1孔（例E1）做阳性质控
 

我们建议您将质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作，并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加每一质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37 ± 1℃。

1）控品和已稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中，留下A1做空白对照孔。
2）盖板。
3）37±1℃下温育1h±5min

4）温育后，移去粘性金属板，弃取孔内反应液，用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。后在吸水纸上拍干。

注意：洗板步骤很重要，洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革热抗IgG酶标物，盖板。
6）室温下温育30，避免太阳直射
7）重复步骤4
8）在每一微孔中加入100µlTMB底物液
9）室温下（20-25℃）避光温育15min
10）按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。温育之后，包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色。

注意：高阳性的病人样品会引起染色剂沉淀。这些沉淀物会影响OD值的读取。例如：我们建议按1：1的比例用生理盐水预先稀释样品。然后按1：100的比例用稀释液稀释样品，并将结果乘以2。

11）加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。


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代理商：深圳市科润达生物工程有限公司