MicroRNA前体表达克隆

复能基因现在提供:

• 1048条人源、672条小鼠源、408条大鼠源miRNA插入各种表达载体中构建的miExpress™ microRNA前体表达克隆。
• miRNA靶标的表达克隆编码基因的3’端非翻译区（3’－UTR）涵盖了人类编码基因20000个miRNA靶标表达克隆。（3’－UTR，即编码基因的3’端非翻译区）

利用这些miRNA表达克隆研究相应基因或者蛋白的表达调节情况。配合采用荧光素酶报告基因的靶标克隆，可以和miRNA表达克隆一起进行miRNA功能筛选合确证，以及miRNA靶标基因的筛选和确证的交互实验。

复能基因同时也提供多套的人类基因组和小鼠基因组的全长基因ORF表达克隆。用于miRNA靶标的对应蛋白的功能互补实验。由于这些ORF克隆不含3’－UTR，可以用于特种miRNA对内源靶基因抑制后的拯救实验，进一步确证miRNA功能及靶标基因。

miExpress™人类基因组的miRNA前体表达克隆       

复能基因采用基于猫免疫缺陷病的慢病毒系统，构建了miRNA前体表达克隆的载体骨架。RNA聚合酶III型的H1启动子驱动转录前体miRNA的茎环前体（大约有150核苷酸长度）。 随后通过RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一载体的CMV启动子的驱动下共表达报告基因eGFP，双顺反子下游的新霉素筛选基因也同时表达。可作为监测miRNA表达，转染和转化的效率的参考标准。

RISC－miRNA复合体通过结合靶基因的mRNA的3’非编码区（3’－UTR）成功地调节靶基因。1）表达水平和翻译水平的抑制；2）mRNA的被切割，被降解和丰度的下降。

miRNA前体表达克隆的特征

• miRNA前体表达克隆涵盖了miRBase（16.0版本）中已知miRNA的95%
• miRNA表达框已*测序确证
• 基于慢病毒载体系统的表达克隆可转染未分化细胞和难转化的细胞，获得与普通分化细胞类似的转染效率
• 提供被转染细胞的存活性的筛选基因，可用于稳定或瞬时表达调控
• 通过应用eGFP可以监测病毒和质粒载体的转染效率