PLANTaid 植物 RNA 助提剂

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

保存条件：常温运输，室温或者 4℃可保存 6 个月。
产品介绍：
植物助提剂 PLANTaid 是针对植物 RNA 提取时，针对富含多糖多酚等不容易清除的特点设计的一种多糖多酚植物 RNA 提取的辅助剂，主要成份为聚乙烯吡咯烷酮等高分子化合物。它们可以和多糖多酚等杂质结合，通过离心去除。它和绝大多数常用的使用高离序盐（chaotropic salts ）如异硫氰酸胍的 RNA 提取方法兼容。使用方法简便，只要在正常的 RNA 提取步骤中加一步骤即可。将 PLANTaid 加入裂解液后，研磨，匀浆，PLANTaid 和多糖多酚等杂质结合，离心将 PLANTaid，多糖多酚和任何不溶解的杂质去除,取上清就可以继续后面的正常RNA 提取步骤。
注意事项：
1.PLANTaid使用过量可能降低RNA产量，由于不同植物中所含多糖，多酚量变异性很大，因此最佳用量应该在实验中适当调整。
2.如果处理的植物量特别少，按照下面比例计算所需裂解液＋PLANTaid 总体积少于200μl的情况下应该使用不少于200μl的总体积
来提取植物RNA，具体为175μl裂解液＋25μl PLANTaid= 200μl。
使用方法：
1.估计待处理植物体积的方法，我们按照100mg/100μl的比例来估计待处理植物体积。
2.查看使用的RNA提取手册（方法）的裂解液和植物处理量之间的比例
如果裂解液：植物处理量（体积比）≤9:1,则在所需裂解液中加入九分之一裂解液体积的PLANTaid;
如果裂解液：植物处理量（体积比）>9:1,则在所需裂解液中加入和植物处理量等体积的PLANTaid。
3.举例说明：
1）如果RNA提取手册上面裂解液：植物处理量=5:1,植物处理量为100mg(我们认为体积为100μl)，所需裂解液为100μl×5= 500μl，
再加入500μl×1/9＝55.6μl的PLANTaid. 2）如果RNA提取手册上面裂解液：植物处理量=10:1, 植物处理量为100mg(我们认为体积为100μl)，所需裂解液为100μl×10 = 1000μl，再加入100μl即和植物处理量等体积的PLANTaid。
3）使用上面的混和液按照正常操作步骤研磨，匀浆处理后，将裂解物用最高速（12000-14000rpm）室温下离心5 sec。不溶的细胞碎片，PLANTaid和它结合的多糖多酚等杂质可以通过此离心步骤去除。

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备？

试剂:
模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
设备：
PCR仪：用于控制反应温度，保证PCR反应时不同温度环节的严格控制；电泳槽：用于分离PCR扩增产物；核酸提取仪：从组织样本中全自动提取核酸。 这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是，只有在有序齐全的基础上，才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验：

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：

一、变性：

利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性：

在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸：

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化：

1、变性温度和时间：

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。

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