应用SEC柱G4000SWXl色谱柱

应用SEC柱G4000SWXl色谱柱 口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是传染性的家畜疫病之一。目前，我国对口蹄疫采取以灭活疫苗免疫为主的防控策略，使用的灭活疫苗以双相油乳剂疫苗为主，疫苗的质量对于口蹄疫的防控关重要^[1-2]。疫苗对动物的保护效果主要取决于两个方面，一是疫苗毒株与流行毒株的相似程度，二是疫苗中抗原的含量^[3]。使用体积排阻色谱法（G4000SWxl色谱柱）对灭活的口蹄疫病毒液中的 146S 抗原进行检测，该技术在疫苗生产工艺研究和质量控制中均具有应用前景。

色谱条件

应用SEC柱G4000SWXl色谱柱(7.8 mm×30 cm) 色谱柱 (TOSOH)、TSKgel guard column SW_XL(6.0mm×4cm)保护柱(TOSOH)；流动相：pH7.2的 50 mmol/L 磷酸缓冲液，含 0.1 mol/L Na₂SO₄； 紫外检测器检测波长：259 nm；流速：0.6 mL/min。将 146S 纯化样品色谱检测结果作图，经线性回归处理，得到146S的回归方程为：Y=45216X–78 422 (R²=0.996， n=10)，结果表明， 146S 在0.56–67.42 µg/mL 范围内呈良好的线性关系，当浓度为 0.56 µg/mL 时，S/N=14.62，满足定量限要求。146S 抗原保留时间在 13–14 min 。

耐受性实验

通过改变流动相pH值和环境温度，考察方法耐受性。TSKgel G4000SWxl色谱柱pH适用范围在2.5-7.5，且应置于4-30°C。维持146S抗原稳定性的适pH值为7.8。调节流动相pH范围在6.9-7.5之间。146S抗原色谱峰保留时间和峰形*，考虑到色谱柱耐受性，选用该流动相未经过调节的pH值7.2-7.4。为防止146S降解，需注意实验室温度不应过高，且仪器样品盘英设定低温进样。