利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量
- 公司名称 富士胶片和光（广州）贸易有限公司
- 品牌 Wako/和光纯药
- 型号
- 产地
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2020/10/12 16:00:23
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| 供货周期 | 一个月以上 | 应用领域 | 生物产业 |
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利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量
检测氨基酸饮料的氨基酸
和光纯药工业株式会社 试剂化学实验室 須藤 勇紀
◆前言
自从天冬酰胺在1806年从芦笋汁中分离成功以来，人们开始发现氨基酸，并将其大致分为四类，即作为营养物质的利用，作为味道成分的利用，生理作用的利用，反应性的利用，这些功能在我们生活中是*的 1）。另外，在动物体内无法合成的氨基酸既是动物的必需氨基酸，也是很重要的食物营养素。
在日本实施的1991年特定保健食品体系、2002年保健功能食品体系、2015年功能性食品体系过程中，也是期待着将氨基酸作为保健品用于国民自我治疗药物的实践中 2,3）。功能性标示食品制度因其呈报制度更便于新企业参与。2017年3月特定保健用食品的数量为1,127件，功能性标示食品从以往的815件正在急剧增加中。从而可预计保健食品市场将迅速扩大。氨基酸作为营养素的功能已被广泛认可，以饮料，健康饮料，果冻等多种形态的氨基酸的食品流通于市场中 1），未来也将继续推出更多含有氨基酸的新型食品。
◆3-氨基吡啶-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（APDS）衍生化
高效液相色谱法（HPLC）中的氨基酸分析衍生化技术是很久以前便存在的，因此市面上也存在许多种类的衍生剂，其中包括茚三酮和邻苯二甲醛。本次介绍的APDS氨基酸衍生化技术是一种具有高疏水性，且因其高电离效率更有利于反相LC/MS（/MS）的方法。
该方法不仅用于味之素株式会社的“Amino index® 癌症风险筛选”（AICS）7）。在食品分析中也用于氨基酸分析装备（UF-Amino Station）的分析案例 8）。
Wakopak® Ultra APDSTAG® 是一种分析柱，可利用LC / MS / MS仪器对APDS-氨基酸衍生物进行分离分析。本次我们介绍的是使用该柱分析市售氨基酸饮料中的氨基酸种类。
◆实验方法和结果分析
样品前处理和衍生化的流程如图1所示，LC/MS/MS条件如表1所示。 定量采用内标法进行。在这次实验的饮料中，据材料记载氨基酸种类含有甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），亮氨酸（Leu），异亮氨酸（Ile）和精氨酸（Arg）这六种种类，但市售饮料中都不含表1的N0.13~20的氨基酸类。图2显示的是市售饮料中的6种氨基酸的MRM色谱分析图。接下来，将氨基酸标准品加入到获得该色谱的样品中，并进行回收实验。图3显示的是添加标准品后饮料的MRM色谱图，而图4则是加标回收实验的结果显示图。回收率高达99-103％。
根据这次研究的结果显示，使用Wakopak® Ultra APDS TAG® 进行APDS衍生化的氨基酸定量检测是有效的。虽然这次推出的结果仅限于饮料，但对于分析其他食品和培养液等样品也是有用的，欢迎采购此产品用于定量分析氨基酸。
表１．LC/MS/MS条件
设备 | Prominence LC-20A XR（岛津公司） |
柱 | Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1×100 mm（W） |
防护过滤器 | SunShell RP防护过滤器（Cromanic Technologies） |
流动相A | APDS TAG® 洗脱液 |
流动相B | 60％乙腈 |
梯度条件 | 0 min.（A：B=94：6）→0.05 min.（92：8） →1.70 min.（92：8） →1.71 min.（88：12）→4.95 min.（70：30）→5.95 min.（40：60）→5.96 min.（5：95）→6.70 min.（5：95） →6.71 min.（94：6）→12 min.（94：6） |
流量 | 0.3 mL/min. |
柱温 | 40 ℃ |
注射量 | 1 μL |
设备 | LCMS-8030 Plus（岛津公司） |
电离 | ESI positive |
测量模式 | MRM |
DL温度 | 250 ℃ |
雾化器气体流量 | 1.5 L/min. |
加热块温度 | 250 ℃ |
干燥气体流量 | 10 L/min. |
No. | 组件名称（简称） | 分子量 | 监测因子（m/z） | |
前体 | 制品 | |||
1 | 甘氨酸（Gly） | 75.1 | 196.1 | 121.0 |
2 | 甘氨酸-13C2，15N（Gly-IS） | 78.1 | 199.1 | 121.1 |
3 | 丙氨酸（Ala） | 89.1 | 210.1 | 121.0 |
4 | 丙氨酸-13C3（Ala-IS） | 92.1 | 213.1 | 121.1 |
5 | 缬氨酸（Val） | 117.2 | 238.1 | 121.0 |
6 | 缬氨酸-13C5, 15N（Val-IS） | 123.1 | 244.1 | 121.1 |
7 | 亮氨酸（Leu） | 131.2 | 252.1 | 121.0 |
8 | 异亮氨酸（Ile） | 131.2 | 252.1 | 121.0 |
9 | 亮氨酸-5,5,5-d3（Leu-IS） | 134.2 | 255.1 | 121.1 |
10 | 异亮氨酸-13C6,15N（Ile-IS） | 138.1 | 259.1 | 121.1 |
11 | 精氨酸（精氨酸） | 174.2 | 295.1 | 175.1 |
12 | 精氨酸-15N4（Arg-IS） | 178.2 | 299.1 | 179.1 |
13 | 肌氨酸（Sar） | 89.1 | 210.0 | 121.0 |
14 | 羟脯氨酸（Hypro） | 131.1 | 252.1 | 121.0 |
15 | 天冬酰胺（Asn） | 132.1 | 253.1 | 121.0 |
16 | 天冬氨酸（Asp） | 133.1 | 254.1 | 121.0 |
17 | 谷氨酰胺（Gln） | 146.1 | 267.1 | 121.0 |
18 | 谷氨酸（Glu） | 147.1 | 268.1 | 121.0 |
19 | α-氨基己二酸（α-AAA） | 161.2 | 282.1 | 121.0 |
20 | 瓜氨酸（Cit） | 175.2 | 296.3 | 121.0 |
图2.市售饮料中6种氨基酸成分的MRM色谱图
图3.添加标准品后饮料的MRM色谱图
图4.加标回收实验的结果显示图
<致谢>感谢味之素股份有限公司的每一位同仁对本产品的合作。
Wako Pack® Ultra APDS Tag®通用LC/MS可以实现高灵敏度和高速氨基酸分析。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
235-63973 | Ultra APDS TAG® 氨基酸分析柱 | 1支 |
◆相关产品
产品编号 | 产品名称 | 标准/制造商 | 规格 |
014-23841 | 氨基酸分析试剂（用于LC/MS） | 用于氨基酸自动分析 | 100毫克 |
011-14463 | 氨基酸混合标准溶液, AN-2型 | 用于氨基酸自动分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
015-14461 | |||
012-08643 | 氨基酸混合标准溶液, B型 | 用于氨基酸自动分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
016-08641 | |||
019-08393 | 氨基酸混合标准溶液, H型 | 用于氨基酸自动分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
013-08391 | |||
293-73701 | APDS TAG® Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution | 用于氨基酸自动分析 | 1套 |
010-23061 | APDS标签洗提液 | 用于氨基酸自动分析 | 1升 |
019-23151 | APDS标签硼酸盐缓冲液 | 用于氨基酸自动分析 | 1升 |
380-04131 | SunShell RP Guard Filter Starter kit （a holder, a cartridge, a tubing） | Cromic技术 | 1套 |
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