40310ES20 Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
- 公司名称 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型号 40310ES20
- 产地 翌圣生物
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2022/11/7 15:27:23
- 访问次数 2105
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企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
分子生物学试剂，细胞生物学试剂，免疫学试剂，蛋白组学试剂等
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 20T |
|---|---|---|---|
| 货号 | 40310ES20 | 应用领域 | 生物产业 |
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 | 40310ES20 | 20 T | 480.00 |
40310ES50 | 50 T | 960.00 | |
40310ES60 | 100 T | 1680.00 |
产品描述
Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE（Phycoerythrin）标记的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝\氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝\氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外，本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的///佳替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-PE与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-PE和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。
产品组分
编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | ||
40310ES20（20T） | 40310ES50（50T） | 40310ES60（100T） | ||
40310-A | 重组人Annexin V/PE*（rh Annexin V/PE） | 100 µL | 250 µL | 500 µL |
40310-B | 7-AAD Viability Staining Solution（20µg/mL） | 200 µL | 500 µL | 1.0 mL |
40310-C | 1×Binding Buffer | 10 mL | 25 mL | 50 mL |
*来源于大肠杆菌（E.coli），分子量为35.8 KDa，纯度＞98%（SDS-PAGE&HPLC）
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光长期保存，避免反复冻融，一年有效。
【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效。
注意事项
1）试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2）由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
3）对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰\酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，7-AAD摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝\氨酸与Annexin V-PE的结合。消化时将胰\酶铺满孔板底后，轻摇时胰\酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰\酶，利用剩余的少量胰\酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
4）如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。
5）7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防///护///服、戴手套等。
6）Annexin V-PE和7-AAD是光敏物质，在操作时请注意避光。
使用说明
1 样品染色
1） 悬浮细胞：300 g，4 ℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞：用不含EDTA的胰\酶消化后，300 g，4 ℃离心5 min收集细胞。胰\酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2）用4 ℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300 g，4 ℃离心5 min。
3）吸弃PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1×106细胞/mL。
4）加入5 μL Annexin V/PE和10 μL 7-AAD，轻轻混匀。
5）避光、室温反应10-15 min。
6）加入400 μL 1×Binding Buffer，混匀，样品在1 h内检测。
注：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
2 观察检测
A、流式细胞仪分析
1）用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488nm；发射波长Em=578 nm，Annexin V-PE的橙红色荧光建议使用FL2通道检测；激发波长Ex=546 nm；发射波长Em=647 nm，7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），PE为横坐标，7-AAD为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型的实验中，细胞可以分成三个亚群，活细胞仅呈很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅呈较强的橙红色荧光，晚期凋亡细胞呈橙红和红色荧光双重染色。
2）荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
B、荧光显微镜观察
1）滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2）对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
a 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
b 用PBS洗涤细胞两次；
c 在500 μL的Binding Buffer中加入5 μL Annexin V-PE，10 μL 7-AAD染液混匀；
d 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
e 室温避光孵育5 min。
3）将盖玻片倒置于载玻片上，在荧光显微镜下用双色滤光片观察。滤光片（罗丹明）观察Annexin V-PE 荧光信号呈橙红色；用激发波长546 nm，发射波长647 nm，观察7-AAD荧光信号呈红色。
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HB200911
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