类胰岛素生长因子1试剂盒

1、IGF-1试剂盒前言说明

类胰岛素生长因子1试剂盒为血清IGF-1的定量检测提供了其所需材料。此检测试剂盒仅供提外诊断用。

2、IGF-1试剂盒临床意义

类胰岛素生长因子-1（IGF-1）是一由70个氨基酸分子组成的多肽（分子量为7650道尔顿），它是胰岛素循环过程中众多相关类胰岛素生长因子中的一种。此分子与前胰岛素大约有50%的同源性，并且它有很多与胰岛素相似的生物学功能。此多肽具有高度的生长激素（GH）依赖性，但也越来越表现出GH非依赖性分泌。IGF-1有很多促进生长的功能，包括促进细胞分裂和软骨的硫酸化,它也可显示出骨的更新速度。循环中的IGFP-1几乎有95%以上都结合到特异性IGF结合蛋白（目前知道它有六个亚种）上。BP3是IGF-1的主要结合蛋白，它与IGF-1及一个酸性易变亚基一起形成一分子量为140000道尔顿的三元络合物。

3、类胰岛素生长因子1试剂盒临床应用

血清IGF-1的检测在小孩生长紊乱及支端肥大症的诊断和治疗检测中具有重要意义。IGF-1的浓度会随人的年龄、营养状态、身体结构和生长激素的分泌而发生变化。IGF-1的检测有利于身材矮小儿童的评价和恶性疾病病人的营养学研究。在支端肥大症的诊断中，IGF-1的检测与随机GH的检测相比，前者更具有可靠性。

4、实验原理

IGF-1 600ELISA试剂盒是一种固相的酶联免疫实验，采用争竞法的原理。实验开始前将病人样品、标准品和质控品先酸化和中和好。包被板的微孔中包被了单克隆抗体，这种单克隆抗体对IGF-1分子上的某单一抗原位点具有特异性。将预先处理好的样品与酶联物（生物.素标记的IGF-1）在室温下温育。之后洗板，再加入酶复合物（辣根过氧酶标记的链亲和素）并温育。加入底物溶液后，溶液所显示的颜色强度与病人样品中IGF-1的浓度成反比。

5、成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于样品的酸化。

2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用，用于中和。

3. 包被板，12×8（可拆），96孔，包被孔中包被了抗IGF-1抗体（单抗）

4. 标准品（标准品0-6），7支，1ml，浓度：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC编号：87/518，转换系数：1ng/ml×0.13=nmol/l。内含0.03%的Proclin300和0.005%的庆.大霉素硫酸盐做为防腐剂。

5. 酶联物，1支，14ml，即用，生物.素标记IGF-1，内含0.01%的甲基异噻唑酮，0.02%的BND防腐剂。

6. 酶复合物，1支，20ml，即用，HRP标记的链亲和素复合物。

7. 底物液，1支，14ml，即用，TMB

8. 终止液，1支，14ml，即用，内含0.5M的H2SO4。避免接触终止液，以免着烧或刺激皮肤。

9. 洗涤液，1支，30ml（40倍浓缩）

注意：用于样品稀释的零标准品应视需要而定。

6、IGF-1试剂盒实验所需器材（但试剂盒不提供）

1. 酶标仪

2. 移液器

3. 吸水纸

4. 蒸馏水

5. 1.5ml的反应杯（用于样品的准备）

6. 通用的指示纸

7、IGF-1试剂盒的储存与稳定性

  未开启的试剂在2—8℃下贮存，在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂。开封了的试剂必须储存于2-8℃的环境下。微孔反应板也必须在2—8℃下贮存。一旦包装袋被打开，必须将它小心地严封起来。拆开包装后，包被的微孔反应板的免疫活性可在约6周内保持稳定，但必须密封在装有干燥剂的袋子里。

8、IGF-1试剂盒样本

血清可以用于此实验，注意：据观察，血浆中的IGF-1浓度明显降低。切勿使用溶血、黄疸或脂血样品。请注意：含叠氮钠的样品不能用于此实验。

8.1样品的采集

血清：静脉穿刺采集全血，待其凝血，室温下离心获取血清。在样品未*凝结前请勿离心。接受了抗凝血治疗病人的样品可能需要更长的凝血时间。

8.2样品的储存：

样品应当立即检测。如果实验前想要将样品存放更长的时间，则应将样品冻存于-20℃的环境下。解冻的样品在实验前应反复倒置几次。

8.3样品的稀释：

在*实验时，如果血清样品中IGF-1的浓度高于zui高标准品中IGF-1的浓度，则应将此样品用零标准品稀释，并按实验步骤重新检测。在计算浓度时应当将此稀释因子考虑进去。

例如：

• 按1：10的比例稀释：10μl的血清+90μl零标准品（充分混合）

• 按1：100的比例稀释：10μl已稀释好的a）+90μl零标准品（充分混合）

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9、病人样品和标准品的酸化与中和

1. 在1.5ml的反应Caps中加入200μl样品、标准品和质控孔。请注意：按照下列所述步骤，标准品既要进行酸化，也要进行中和。

2. 在加入20μl 1M的HCl。

3. 混合并温育15min。

4. 向所有的Caps中加入20μl 1M的NaOH进行中和，混合溶液。

5. 中和之后的pH值应该是7到8之间，请用通用指示纸检测pH值。