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过表达慢病毒构建及包装

慢病毒包装

1 、 特点：

1.1 直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。

1.2 可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。

1.4 无需转染试剂，操作简便。

1.5 可以根据客户需要制备多种标记。

2 、 原理：

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

3 、 过表达慢病毒包装简要流程：

3.1 含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。

注：客户也可以提供构建好的重组慢病毒表达载体。

3.2 慢病毒表达载体与包装系统共转染病毒包装细胞。

3.3 收集病毒液。
3.4 纯化和浓缩病毒。

3.5 分装、- 80 ^oC保存。
3.6 滴度测定及无菌检测。

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