亲水作用色谱（HILIC）已经作为一种分离强极性化合物的工具得到广泛应用。事实上，它已经成为一种较为普遍的小分子分离技术。相比之下，即使HILIC的分离选择性在某些情况下（如在糖基化蛋白质的表征中）具有很大价值，HILIC在大分子方面的应用仍相对有限。分析蛋白糖基的一种标准方法是通过酶或化学方法将其从对应蛋白质中释放出来，然后采用HILIC进行色谱分离。以经过优化的亚2 μm酰胺键合固定相为基础的UPLC型分离通过提高分离速度与分离度，*颠覆了游离蛋白糖基的HILIC分离。尽管游离糖基分析是一种黄金标准方法，但一直以来它都需要冗长而繁琐的样品制备技术。虽然zui近推出的GlycoWorks™RapiFluor-MS™ N-糖分析试剂盒能够弥补多数不足，但在有些情况下仍需要研究表征糖基化蛋白的替代方法，例如在需要阐明修饰位点时。

为了在糖基仍连接在对应蛋白质上时即对其进行补充分析，我们推出了经优化的HILIC固定相及相应方法用于分离完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型。研究采用大孔径（300Å）酰胺键合有机硅（亚乙基桥杂化，BEH）固定相和精心开发的方法，实现了对质量范围为10~150 kDa的完整蛋白质糖型的出色分离。