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石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒是经过精心优化的、基于 MMLV 逆转录酶和 Taq DNA 聚合酶的双酶一管式RT-PCR 试剂盒，它含有除模版 RNA 和其专一性引物以外的所有 RT-PCR 试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成 RNA→cDNA→PCR 反应 (RT-PCR 反应)，

石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒特点如下：
1. 一管式完成 RT-PCR 反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备 RT-PCR 所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个 RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到zui低，
极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒 RNA 到人 RNA 的各种 RNA 模板。
5. 高灵敏度，每个 RT-PCR 体系zui低可以检测 200 拷贝的 RNA 分子，可扩增的模版
RNA 的zui长达 2000 nt。
6. 所得 RT-PCR 产物可以直接用于 AT 克隆。
规格及成分 成 份 编 号 50 次包装
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 750 uL
MMLV-Taq Mix 100 uL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手册 91202sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
1. RNA 模板：总 RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用 HPLC 或 PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的 tip 头，离心管,薄壁 PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或 Real-time PCR 仪。本产品适用于下列 Realtime PCR 仪：ABI PRISM
7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、
BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明
书。
使用方法 注意：所有离心管用前zui全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个
30uL 体系的 RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
1. 在一干净的无 RNase 的 PCR 管中，先加入下列成分：
成分 阴性对照 样品
RNA 模板（自备，分下面三种情况） 无 见下
总 RNA 无 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 无 10-500 ng
或体外转录得到的专一 RNA 无 0.01 pg-500ng
RNA 特异性引物一（自备） 终浓度 300nM 终浓度 300nM
RNA 特异性引物二（自备） 终浓度 300nM 终浓度 300nM
探针（仅对 Realtime RT-PCR） 终浓度 200nM 终浓度 200nM
RNase-free 水 补到 13 uL 补到 13 uL
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 15 uL 15 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL
注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度 300nM，探针浓度 200nM 进行实验，
根据实验结果具体情况，在 200～800nM 范围内调整引物浓度，在 50～400nM 范
围内调整探针浓度以达到*检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以
根据实际情况调整，同时增减 DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR。
3. 设定 RT-PCR 反应条件时，一般将 RT 的条件设定成 42℃ 30 分钟，后接 94℃变
性 5 分钟，然后进入 PCR 循环（PCR 参数将根据自备引物的 Tm 值由用户自行决
定注）、zui后 72℃ 5 分钟。对 Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通
道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR 结束后取 5-10 uL 电泳检查。
注意事项
1. 使用已校准的移液器，选用一次性 PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及
配液等操作，所有用具应不含 DNA 酶和 RNA 酶。
2. 引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置
尽可能靠近上游引物, PCR 目标片段zui小于 200bp，尽可能在 150bp 以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防 RNA 酶污染及操作不当导致的 RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对 RT-PCR 扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择zui适
当的引物浓度、样品浓度和 PCR 扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记 PCR 反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR 反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指
将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光 PCR 仪器连续进行实验时，zui间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光 PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用 Roch LightCyclerTM 荧光 PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分
装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放
入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用小毛刷擦拭干净后方可进
行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免 PCR 产物污染。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)关联产品 两管式 RT-PCR 试剂盒(CAT#:80206)：此产品适合于制备长 cDNA 用于构建 cDNA 文
库。